组织培养所用材料非常广泛

一、培养材料的采集

组织培养所用的材料非常广泛，可采取根、茎、叶、花、芽和种子的子叶，有时也利用花粉粒和花药，其中根尖不易灭菌，一般很少采用。

 对于木本花卉来说，阔叶树可在一、二年生的枝条上采集，针叶树种多采种子内的子叶或胚轴，草本植物多采集茎尖。

在快速繁殖中，常用的培养材料是茎尖，通常切块在0.5厘米左右，如果为培养无病毒苗而采用的材料通常仅采取茎尖分生组织部分，其长度在0.1毫米以下。

二、培养材料的消毒

1、先将材料用流水冲洗干净，最后一遍用蒸馏水冲洗，再用无菌纱布或吸水纸将材料上的水分吸干，并用消毒刀片切成小块。

2、在无菌环境中将材料放入70%酒精中浸泡30-60秒。

3、再将材料移入漂白粉的饱和液或0.01%升汞水中消毒10分钟。

4、取出后用无菌水冲洗三、四次。

三、制备外植体

将已消毒的材料，用无菌刀、剪、镊等，在无菌的环境下剥去芽的鳞片、嫩枝的外皮和种皮胚乳等，叶片则不需剥皮。然后切成0.2-0.5厘米厚的小片，这就是外植体。在操作中严禁用手触动材料。

四、接种和培养

1、接种

在无菌环境下，将切好的外植体立即接在培养基上，每瓶接种4-10个。

2、封口

接种后，瓶、管用无菌药棉或盖封口，培养器用无菌胶带封口。

3、温度

培养基大多应保持在25°C左右，但要因花卉种类及材料部位的不同而区别对待。

4、增殖

外植体的增殖是组培的关键阶段，在新梢等形成后为了扩大繁殖系数，需要继代培养。把材料分株或切段转入增殖培养基中，增殖培养基一般在分化培养基上加以改良，以利于增殖率的提高。增殖1个月左右后，可视情况进行再增殖。

5、根的诱导

继代培养形成的不定芽和侧芽等一般没有根，必须转到生根培养基上进行生根培养。1个月后即可获得健壮根系

五、组培苗的练苗移栽

试管苗从无菌到光、温、湿稳定的环境进入自然环境，必须进行练苗。一般移植前，先将培养容器打开，于室内自然光照下放3天，然后取出小苗，用自来水把根系上的营养基冲洗干净，再栽入已准备好的基质中，基质使用前最好消毒。移栽前要适当遮荫，加强水分管理，保持较高的空气湿度（相对湿度98%左右），但基质不宜过湿，以防烂苗。